关于细胞培养的常见问题
Q:培养液到底要不要加双抗(青&链)?
A:双抗不是细胞生长必需的。我们培养细胞时不常规使用,因为连续使用会促进耐药性细胞株的产生,导致轻度污染持续存在。一旦将从培养液中去除,这种轻度污染终将发展成为大规模污染。具体情况,可根据自己实验室的环境,自行决定是否使用双抗。
Q:细胞培养,能更换成其它种类的培养基吗?
A:我们强烈建议好使用细胞提供机构或细胞库推荐的生长培养液。有些细胞可能会适应在不同培养基中生长,细胞,在做好保种的条件下,可以分出部分细胞做测试。
大鼠shen小球内皮细胞分离培养
2.原代细胞培养:(1)shen脏原位灌洗:SD大鼠用25%乌拉坦腹整注射麻后仰卧固定。胸腹部消森并分离胸主动脉,以无菌的冷Hank液漱朱洗血.同时剪破shen静脉利于液体流出。1-2min后shen脏色泽变白,取出双shen冰浴保存。
(2)shen小球分离:参照Green等方法改进。将灌洗后的shen脏撕下shen被膜.去除髓质后将皮质剪成约1-2mm'的碎块,轻碾shen皮质依次通过80.120和200目钢筛。收集shen小球。
(3)shen小球消化和培养;将提取的shen小球加人0.1% IN 型胶原酶消化后收集沉淀。以2x10* 的shen小球数接种于铺有1%明胶培养瓶内,加A配制好的内皮细胞培养液(MFM.Hepes 20 mmnoVL 20%胎牛xue清0. 66 U胰岛素/ml.血管内皮生长因子20 ng /ml、肝素钠100 u/ml.青莓su100 U/ml、链霉su100 μ/ml) .静止培养3 d后逐日观察shen小球的贴壁情况。待shen小球充分贴壁后常规换液.第3同进行纯化。
细胞培养中常见的污染及解决方法
原生动物污染
原生动物污染后,细胞培养基变得轻微浑浊。在显微镜下,大量的小点来回移动。虽然此时细胞仍能生长,但繁殖速度减慢,细胞生长状态不好,边缘不清,变得不透明。原生动物与细胞形成共生关系。同时,细胞增殖实验,原生动物与细胞竞争营养。这种共生现象非常普遍,但以细胞为主,因为原生动物的数量相对较少,流式细胞检测,因而对细胞的正常生长没有影响,只有当它们达到一定数量时,才终爆发成为循环。
解决方法:原生动物污染的原因有很多,如液体消毒问题、操作问题、环境问题等,细胞迁移实验,如果细胞足够,果断丢弃被污染的细胞和复苏细胞。如果要保留,需要购买使用相关的试剂。