寨卡病毒快速检测试剂盒（elisa法）

寨卡病毒IgM抗体ELISA  96T/盒

样本：(血清和血浆)

（我司同时有登革热，克锥虫，丝虫，非洲锥虫，恙虫，无形体，立次克体，基孔肯热，寨卡病毒，黄热病检测试剂盒，各种质控品，抗原，欢迎致电）

- 仅用于“体外”诊断

A.使用

酶免疫测定（ELISA），用于定量测定人血浆和血清中的寨卡病毒（ZIKA）的IgM抗体。仅用于“体外”诊断。

B.测试原理

微板用与其它黄病毒显示最小交叉反应性的Zika病毒NS1合成抗原包被。

在第一次孵育中，用稀释的样品处理固相，并且抗原捕获抗ZIKV IgM（如果存在的话）。在洗掉样品的所有其它组分后，在第二孵育中，通过加入用过氧化物酶（HRP）标记的抗hIgM抗体来检测结合的抗ZIKV IgM。在固相上捕获的作用于底物/色原混合物上的酶产生与样品中存在的抗ZIKV IgM抗体的量成比例的光学信号。

在测定中进行IgG抗ZIKV的中和，直接在孔中进行，以在IgM的测定中阻断由于这类抗体的干扰。

C.组件

每个试剂盒包含足够的试剂进行96次测试。

微孔板：MICROPLATE

12条×8个用ZIKV特异性合成NS1抗原包被的微孔。将板密封到具有干燥剂的袋中。

2.负控制控制 -

1x2.0ml /瓶。准备使用控制。其含有1％山羊血清蛋白，10mM柠檬酸盐缓冲液pH 6.0 +/- 0.1,0.5％吐温20,0.09％迭氮化钠和0.1％Kathon GC作为防腐剂。阴性对照是黄色编码的。

正控制CONTROL +

1x2.0ml /瓶。准备使用控制。其含有1％山羊血清蛋白，灭活的人抗ZIKV IgM，10mM柠檬酸盐缓冲液pH6.0 +/- 0.1,0.5％吐温20,0.09％迭氮化钠和0.1％Kathon GC作为防腐剂。

阳性对照是深绿色编码。

4.洗涤缓冲液浓缩液：WASHBUF 20X

1x60ml /瓶20x浓缩溶液。一旦稀释，洗涤溶液含有10mM磷酸盐缓冲液pH 7.0 +/- 0.2,0.05％Tween 20和0.05％Kathon GC。

酶联液：CONJ

1x16ml /瓶。准备使用和红色编码。其含有针对人IgM，5％BSA，10mM Tris缓冲液pH 6.8 +/- 0.1,0.1％Kathon GC和0.02％硫酸庆大霉素的辣根过氧化物酶缀合的多克隆抗体作为防腐剂。

6.色原/基质：SUBS TMB

1x16ml /瓶。其含有50mM柠檬酸盐 - 磷酸盐缓冲液pH 3.5-3.8,4％二甲基亚砜，0.03％四甲基联苯胺（或TMB）和0.02％过氧化氢（或H 2 O 2）。

注意：要防止光存储，对强烈的照明敏感。

7.硫酸：H 2 SO 4 0.3M

1×15ml /瓶含有0.3M H 2 SO 4溶液。

注意：刺激性（H315，H319; P280，P302 + P352，P332 + P313，P305 + P351 + P338，P337 + P313，P362 + P363）。

8.标本稀释液：DILSPE

2x60ml /瓶。其含有2％酪蛋白，10mM柠檬酸盐缓冲液pH 6.0 +/- 0.1,0.2％吐温20,0.09％迭氮化钠和0.1％Kathon GC作为防腐剂。用于稀释样品。

9.中和试剂：SOLN NEUT

1x8ml /瓶。其含有山羊抗hIgG，2％酪蛋白，10mM柠檬酸盐缓冲液pH 6.0 +/- 0.1,0.09％迭氮化钠和0.1％Kathon GC作为防腐剂。

10.板密封箔n°2

11.包装插入n°1

D.材料需要但不提供

1.校准微量移液器（1000,100和10ul）和一次性塑料吸头。

2. EIA级水（双蒸馏水或去离子水，经处理以除去用作消毒剂的氧化性化学品的木炭）。

3.定时器有60分钟或更高的范围。

4.吸收纸巾。

5.校准的ELISA微孔板恒温培养箱（干或湿）设置在+ 37℃（+/- 0.5℃公差）。

6.校准的ELISA微孔读数器，具有450nm（读数）和620-630nm（消隐）滤器。

7.校准的ELISA微孔板洗涤器。

8.涡流或类似的混合工具。

E.警告和注意事项

1.只有在负责实验室的医生的监督下，才能由经过专门培训的技术人员使用该试剂盒。

2.参与实验的所有人员必须佩戴防护实验服，不含滑石的手套和眼镜。应避免使用任何尖锐（针）或切割（刀片）设备。根据美国亚特兰大疾病控制中心的建议，所有参与的人员应接受生物安全程序的培训，并在国家卫生研究所的出版物“生物安全微生物和生物医学实验室” 1984年。

3.所有参与样品处理的人员都应接种HBV和HAV疫苗，为疫苗提供安全和有效的疫苗。

4.在打开试剂盒和微量培养板以及进行试验时，应控制实验室环境，以避免污染物，如灰尘或空气中的微生物制剂。保护色原/基板（或TMB）免受强光照射，避免进行测试的台面振动。

5.收到后，将套件在2..8°C下存放在温度控制的冰箱或冷藏室中。

6.不要在不同批次的试剂盒之间交换组件。建议同一批次的两个套件之间的组件不应互换。

7.检查试剂是否清澈，不含可见的重颗粒或聚集物。如果没有，建议实验室主管启动套件更换的必要程序。

8.使用一次性吸头避免血清/血浆样品之间的交叉污染，并在每个样品后更换。

9.通过使用一次性吸头并在每次使用之间更换它们，避免试剂盒试剂之间的交叉污染。

10.不要在外部容器和内部（小瓶）标签上规定的有效期后使用试剂盒。对已打开的试剂盒进行的研究没有指出任何相关的活性损失，多达6次使用该装置和长达6个月。

11.将所有标本视为潜在感染性。所有人血清标本应按照美国亚特兰大疾病控制中心的建议，按照健康研究所出版物“微生物和生物实验室生物安全”（Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories）中所述，在生物安全2级处理。 1984年。

12.在制备液体组分或将组分转移到自动化工作站时，建议使用一次性塑料制品，以避免交叉污染。

13.在使用试剂盒期间产生的废物必须按照关于化学和生物物质的实验室废物的国家指令和法律进行废弃。特别地，从洗涤过程产生的液体废物，来自对照/校准物的残余物和来自样品的液体废物必须作为潜在感染性物质处理并在废物之前失活。建议的灭活方法是用10％最终浓度的家用漂白剂处理16-18小时或者通过在121℃下高压灭菌20分钟进行热灭活。

14.样品和操作的意外泄漏必须用浸有家用漂白剂，然后用水浸湿的纸巾吸附。然后应将组织丢弃在指定用于实验室/医院废物的适当容器中。

15.硫酸是刺激剂。如发生溢出，用大量水冲洗表面。

16.使用试剂盒产生的其他废物（例如：用于样品和对照品/校准品的提示，用过的微量培养板）应作为潜在的传染性物质处理，并根据国家有关实验室废物的指令和法律处理。

F.样品：准备和警告

1.通过静脉穿刺无菌抽取血液，并使用用于临床实验室分析的样品制备的标准技术制备血浆或血清。在用柠檬酸盐，EDTA和肝素制备样品中没有观察到影响。

2.样品必须用代码或名称清楚标识，以避免误解结果。强烈建议使用条形码卷标和电子阅读。

3.溶血（“红色”）和明显高脂血症（“乳白色”）样品必须丢弃，因为它们可能产生错误结果。含有纤维蛋白或重颗粒或微生物细丝和体的残留物的样品应被丢弃，因为它们可能导致错误的结果。

血清和血浆可以在收集后在+ 2°.8°C储存长达五天。对于较长的储存期，样品可以在-20℃冷冻储存几个月。任何冷冻样品不应多次冷冻/解冻，因为这可能产生可能影响测试结果的颗粒。

5.如果存在颗粒，则以2.000rpm离心20分钟或使用0.2-0.8u过滤器过滤以清洁样品用于测试。

G.组件和警告的准备

微孔板：

使微孔板在打开容器之前达到室温（约1小时）。检查干燥剂是否未变成深绿色，表明存储有缺陷。

在这种情况下，致电Dia.Pro的客户服务。

未使用的条必须放回铝袋中，在干燥剂的存在下，牢固地压缩并储存在+ 2°.8°C。当第一次打开时，残留的条带是稳定的，直到干燥剂袋内的湿度指示器从黄色变为绿色。

质控：

准备使用组件。使用前在涡流小心混合。不要稀释！

洗涤缓冲液：

浓缩溶液的全部内容物必须用双重蒸馏水稀释20倍，并在使用前轻轻地颠倒混合。在制备过程中避免起泡，因为气泡的存在会影响洗涤循环的效率。

注意：稀释后，洗涤溶液在+ 2..8℃下稳定1周

酶联液：

可以使用。使用前在涡流上充分混合。

小心不要用氧化性化学品，空气驱动的灰尘或微生物污染液体。

如果该组分必须转移，则仅使用塑料，可能是无菌的一次性容器。

色原/底物：

可以使用。使用前在涡流上充分混合。

小心不要用氧化性化学品，空气驱动的灰尘或微生物污染液体。

不要暴露在强烈的照明，氧化剂和金属表面。

如果该部件必须转移，只使用塑料，可能无菌的一次性容器

样品稀释剂

准备使用组件。使用前在涡流小心混合。

中和试剂

准备使用组件。使用前在涡流小心混合。

硫酸：

可以使用。使用前在涡流上充分混合。

注意：刺激性（H315，H319; P280，P302 + P352，P332 + P313，P305 + P351 + P338，P337 + P313，P362 + P363）。

警告H语句：

H315 - 造成皮肤刺激。

H319 - 造成严重眼刺激。

I.结果

测试结果通过利用下式根据阴性对照（NC）的平均OD 450nm值确定的截止值来计算：

NC + 0.250 = Cut-Off (Co)

阴性质控 + 0.25 = 截止值 (Co)

为测试找到的值用于解释结果，如下一段所述

重要的提示：

当结果的计算由ELISA自动化工作站的操作系统执行时，确保使用适当的公式来产生正确的结果解释。

问：结果的解释

测试结果被解释为样品OD 450nm值（S）和截止值（Co）或S / Co的比率，根据下表：

阴性结果表明患者尚未发展针对ZIKA的IgM抗体。

阳性结果指示正在进行的ZIKA感染。

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