供应人－二磷酸甘油酸酶联免疫试剂厂家报价

【工作原理】
2，3－二磷酸甘油酸 2，3－diphosphoglycerate 高浓度存在于红细胞中，也存在于其他细胞中，在如下的反应中生成： 1，3-二磷酸甘油酸+3-磷酸甘油酸3-磷酸甘油酸+2，3－二磷酸甘油酸属于糖酵解酶系的磷酸甘油酸变位酶似乎可催化此反应，此酶原来的功能是催化3-磷酸甘油酸2-磷酸甘油酸的反应，此时2，3－二磷酸甘油酸是作为辅助因子而起作用的。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
【每套试剂盒中内容】(96T)

材料 数量
人2,3-DPG标准品 96T(2vial)
预包被人2,3-DPG抗体的96孔板 96T（8×12）
生物素标记人2,3-DPG抗体 96T (1:100)
ABC（亲和素-过氧化物酶复合物） 96T (1:100)
样品稀释液 96T×2
人2,3-DPG抗体稀释液 96T×1
ABC稀释液 96T×1
TMB显色液A 96T×1
TMB显色液B 96T×1
TMB终止液 96T×1
ELISA专用洗涤液 96T×1(1:25)

【需要而未提供的试剂和器材】
1． 37℃恒温箱。
2． 标准规格酶标仪。
3． 自动洗板机。
4． 单通道或多通道可调节移液器以及其吸头。
5． 蒸馏水，容量瓶等
6． 干净的试管和Eppendof管。

【注意事项】
1. 从-20℃取出的试剂盒，最好在4℃解冻过夜。盒内每一瓶解冻的溶液在开启瓶盖之前都要轻轻摇匀，避免解冻时出现的分层，否则会出现浓度不均一的现象。
2. 开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。
3. 配制各种试剂时，切记混匀！
4. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
5. 建议所有人2,3-DPG标准品、样本都做双份检测。
6. 要严格避免操作过程中酶标板干燥。干燥会使酶标板上生物成份迅速失活！
7. 为免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。

【洗板方法】
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBS或TBS洗涤缓冲液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

【样品的准备和保存】
样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。
血清——用干净试管收集血液，室温凝固2小时或4℃过夜，离心1000×g 10分钟，收集血清。立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

【样品稀释的一般原则】
用户须查阅文献了解标本内待测因子的含量，决定适当的稀释倍数，以使稀释后样品中待测因子的浓度处于ELISA试剂盒的最佳检测范围。样品的稀释应有详细记录。

【试剂的准备和保存】
A. 人2,3-DPG标准品的稀释和使用：在使用前2小时内准备。将冻干品管内加入1ml样品稀释液，彻底溶解后做倍比稀释。
稀释后的人2,3-DPG标准品在2小时内使用。

B．生物素标记人2,3-DPG抗体工作液：在使用前2小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实际配制时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul生物素标记人2,3-DPG抗体加人2,3-DPG抗体稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

C．亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）工作液的准备：在使用前1小时内准备。
1． 根据每孔需要0.1ml计算总的用量（实配时应多配制0.1-0.2ml）。
2． 按10ul亲和素-过氧化物酶复合物（ABC）加ABC稀释液990ul的比例配制工作液。轻轻混匀。

D. TMB显色工作液的准备：在使用之前30分钟，按TMB显色液A 9份加 TMB显色液B 1份的比例配制TMB显色工作液。

【操作程序】
1． 确定本次检测所需的已包被人2,3-DPG抗体的酶标板孔数目。
2． 将倍比稀释的人2,3-DPG标准品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加样品稀释液的作为对照。处理后的标本按100ul每孔加入。
3． 酶标板加上盖，37℃反应90分钟。
4． 反应后用自动洗板机吸去酶标板内的液体；或甩去酶标板内液体，再对着吸水纸拍几下。洗涤2次。
5． 将准备好的生物素人2,3-DPG抗体工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应60分钟。
6． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡1分钟左右。
7． 将准备好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反应30分钟。
8． 0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡1-2分钟左右。
9． 按每孔0.1ml依次加入TMB显色工作液，37℃避光反应，反应过程中，要经常的观察，当肉眼可见人2,3-DPG标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔差别不明显时，即可加入TMB终止液0.1ml/孔。（显色反应最长不要超过30分钟）。
10． 用酶标仪在450nm测定O.D.值。
11． 根据样品的吸光值在坐标上找出对应的浓度。用户也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了N倍，其实际浓度应该×N。

【操作程序总结】：
准备试剂，样品和人2,3-DPG标准品

加入准备好的样品和人2,3-DPG标准品，37℃反应90分钟

洗板2次，加入生物素化人2,3-DPG抗体工作液，37℃反应60分钟

洗板3次，加入ABC工作液，37℃反应30分钟

洗板5次，加入TMB显色液，37℃反应

加入TMB终止液

30分钟之内读OD值

计算标本待测因子含量


【检测范围】：40nmol/ml→0.625nmol/ml。
【敏感性】： ＜0.05nmol/ml
【特异性】： 系统和其它细胞因子无交叉反应。
【保存】： -20℃ [短期内（如两周）可4℃
【有效期】： 12个月（-20℃）。
【用途】： 用于体外定量分析液体标本（通用型）。