定量PCR研究资料已表明,病原体数量与chuan染床症状轻重与血液中的病毒量显著相关;也有研究表明,HIV病毒载量低于一定值时,没有chuan染性。在乙型干炎病毒、丙型干炎病毒定量研究中发现,病毒的数量与某些yao物的功效相关。例如,干扰素zhi疗对干炎病毒高拷贝者不敏感,低拷贝者敏感;而有些yao物则具有显著降低病毒高拷贝的作用。
聚合酶链式反应,又称体外DNA扩增技术。近年来发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。PCR技术: 1985年由美国Cetus公司的KaryMullis首创,可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。
优点:敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等,PCR快速检测供应,广泛应用于微生物学、考古学、法医学及体育等领域,并已普及到许多普通实验室,大大简化了传统的分子克龙技术,从而比较容易地对目的基因进行分析、鉴定。
PCR检测试剂盒反应五要素:参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
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