登革热快速检测试剂盒

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产品详情（广州市登革热快速检测试剂盒厂家）

级别：其它

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关键词：广州市登革热快速检测试剂盒厂家

澳大利亚Panbio登革热快速检测Elisa使用说明书

（我司同时有登革热，克锥虫，丝虫，非洲锥虫，恙虫，无形体，立次克体，基孔肯热，寨卡病毒，黄热病检测试剂盒，各种质控品，抗原，欢迎致电）

【产品名称】

通用名称：登革热快速检测试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Panbio Dengue IgG Capture ELISA

【包装规格】

96T/盒

【预期用途】

Panbio Dengue IgG Capture ELISA 用于推断性定性检测登革热病毒（1-4 血清型）继发性感染患者的 IgG抗体升高，辅助临床实验室诊断出现登革热病毒感染临床症状的患者，而且应该与 Panbio Dengue IgM Capture ELISA 和 Dengue Early ELISA 联用。Dengue Early ELISA 也可检测原发性登革热病毒感染。Panbio Dengue IgG Capture ELISA 最早可在疾病发作后 3 天检测到提示继发性登革热感染的高 IgG 水平。然而，准确诊断继发性感染的峰值检测窗口是在疾病发作后 6-15 天。阳性结果是推断出来的，必须经过病毒分离培养、配对血清分析、免疫组织化学抗原检测或病毒核酸检测来确认登革热病毒感染。

【检验原理】

血清中存在的登革热病毒 IgG 抗体，与微孔测试条（测定板）上聚苯乙烯表面包被的抗人 IgG 抗体结合。

用抗原稀释剂将浓缩的重组登革热 1-4 型抗原溶液稀释到正确的工作容积。用昆虫细胞表达系统产生原，用特异性单克隆抗体纯化抗原。在稀释后的抗原中添加等体积的辣根过氧化物酶（HRP）标记单克隆抗体（MAb），形成抗原 MAb 复合物。清洗测定板上的剩余血清，将抗原 MAb 复合物添加到测定板中。然后

这些抗原 MAb 复合物与血清登革热特异性 IgG 抗体结合。在培养完成后清洗微孔，再添加无色的底物系

统 - 四甲基联苯胺/过氧化氢（TMB 显色液）。底物被 HRP（如存在）水解后，显色液变蓝。用酸终止反

应后，TMB 变黄。显色表示测试样本中存在抗登革热 IgG 抗体。

【主要组成成份】

1. 抗人 IgG 包被微孔 - （测定板）

（12x8 孔）。即用型。未使用的微孔应该立即重新密封并储存于干燥环境中。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

2. 登革热 1-4 型抗原（重组） - 1 瓶，无色瓶盖，包含 150μL（红色）浓缩的 1 型、2 型、3 型和 4 型登革热病毒抗原。未使用的稀释抗原必须丢弃。浓缩抗原在有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

3. 清洗缓冲液（20 倍） - 1 瓶，60mL 20 倍浓缩磷酸盐缓冲盐水（pH 7.2 – 7.6），含吐温 20 和防腐

剂（0.1% Proclin?）。低温可能结晶。若去除结晶，可在 37℃孵育液体至澄清。混合均匀。用 19体积的蒸馏水稀释 1 体积的清洗缓冲液。稀释后的缓冲液可在 2-25℃储存一周。

4. 样本稀释剂 – 2 瓶， 50 mL（粉色）。即用型。Tris 缓冲生理盐水（pH 7.2 – 7.6），含防腐（0.1%

Proclin?）和添加剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

5. 抗原稀释剂 – 1 瓶，50mL（无色）。即用型。磷酸盐缓冲液，含防腐剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

6. HRP 标记单克隆抗体示踪剂 – 1 瓶，7mL（绿色）。即用型。辣根过氧化物酶（HRP）标记单克隆抗体示踪剂，含防腐剂（0.1% Proclin?）和蛋白稳定剂。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

7. TMB 显色液（TMB） - 1 瓶，15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基联苯胺和过氧化氢的混合物，存放于

枸橼酸盐缓冲液中（pH 3.5 – 3.8）。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

8. 反应控制品 – 1 瓶，红色瓶盖，200μL 人血清。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

9. 校准品 – 1 瓶，黄色瓶盖，400μL 人血清。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

10. 阴性质控品 – 1 瓶，绿色瓶盖，200μL 人血清。有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

11. 终止液 – 1 瓶，红色瓶盖，15mL。即用型。1M 磷酸。有效期内储存于 2-25℃可保持稳定。

检测需要但未提供的材料：

1. 精确、可调节的微量移液器，含一次性吸液头（5-1000 μL 容积）

2. 去离子水

3. 标板清洗系统

4. 酶标仪，含 450nm 滤波器

5. 计时器

6. 刻度量筒

7. 烧瓶

8. 试管或微滴定板，用于稀释血清

【储存条件及有效期】

有效期内储存于 2-8℃可保持稳定。

有效期可见包装标签。

【样本要求】

静脉穿刺获取的血液应该置于室温（20-25?C）下直到凝块形成，再按照临床实验室标准化研究院（CLSI）

的《认可标准——诊断用血液标本的静脉穿刺采集程序，H3》离心。

应该尽快分离血清。如果在 2 天内不进行检测，血清应该 2-8℃冷藏或低于- 20℃冷冻储存。不推荐使用

自解冻冷冻机储存血清。不推荐使用黄疸血清，以及出现溶血、脂血或微生物生长的血清。CLSI 提供了

储存血液标本的建议《认可标准——血液标本的处理加工程序，H18》。

【检验方法】

在进行检测前必须先完整阅读使用说明书，注：确保所有试剂在开始测定前平衡至室温（20-25 ℃ ）。未在规定的时间和温度范围内进行检测可能产生无效结果，不符合规定的检测应重新实施。

血清预稀释

1. 从铝箔袋中取出所需数量的微孔板并插入测试条槽。阴性质控品（N）、反应质控品（R）和校准品（CAL）各需 5 个微孔，一式三份。确保剩下未使用的微孔密封于铝箔袋内。

2. 使用适当的试管或微滴定板稀释阴性质控品、反应质控品、校准品和患者样本：

（1）混合 10μL 血清与 1000μL 样本稀释剂。混合均匀。或者，

（2）混合 10μL 血清与 90μL 样本稀释剂。取出 20μL 稀释血清，加入 180μL 样本稀释剂。混合均匀。

【参考值（参考范围）】

每个试剂盒包含校准品，反应质控品和阴性质控品。这些组成的可接受值参见附带的规格表。阴性质控品

和反应质控品用于监测重大的试剂失败。反应控制品不能确保测定临界值的精密度。如果质控品或校准品

的任一吸光度读数不符合规定，则测试无效且必须重新测试。如果测试无效，则不能报告患者结果。必须

按照地方、州和/或联邦法规或认证要求以及实验室标准 QC 程序执行质控（QC）要求。有关适当的 QC 操作规程指南，建议用户参考 CLSI C24-A 和 42 CFR 493.1256。

运算

重要提示：校准系数是针对批次的，详见规格表。在开始计算之前获取校准系数值。

1. 计算校准品三份平行试样的吸光度平均值，乘以校准系数，得出临界值。

2. 用样本吸光度除以（以上第 1 步得出的）临界值，计算指数值。或者，

3. 用（以上第 2 步得出的）指数值乘以 10，计算 Panbio 单位。

指数值 = 样本吸光度/ 临界值

例如：样本 A 吸光度=0.949

样本 B 吸光度=0.070

校准品的平均吸光度=0.802

校准系数=0.62

临界值=0.802x0.62=0.497

样本 A 的指数值(0.949/0.497) = 1.91

样本 B 的指数值 (0.070/0.497) = 0.14

Panbio 单位 = 指数值 x 10

样本 A 的 Panbio 单位 1.91x10 = 19.1

样本 B 的 Panbio 单位 0.14x10 = 1.4

结果判读

Panbio Dengue IgG Capture ELISA 推断性检测患者血清中的登革热病毒 IgG 抗体水平升高。阳性结果

（>22 Panbio 单位）提示活动性继发感染。如果怀疑患者是原发性登革热感染，则该测定应该与 Panbio

Dengue IgM Capture (01PE20) ELISA 联用。

【检验结果的解释】

阴性
检测不到 IgG 抗体水平升高。根据 IgG 抗体水平没有升高，可以推
测患者没有继发性登革热感染。Panbio 单位<18 的样本应该用
Panbio Dengue IgM Capture ELISA (01PE20)检测是否存在原发性
登革热病毒感染。应该执行其他登革热检测（例如，培养、PCR、
NS1 抗原检测）来排除急性感染。登革热感染的确诊请参考 CDC
MMWR 建议和报告 1997:46 RR – 10（第 45 页至第 46 页）。
不确定
结果不确定的样本应该一式二份重新检测。如果两个结果都高于或
低于临界值，则报告标本分别为阳性或阴性。如果一个结果高于临
界值而另一个结果低于临界值，或者任一重复检测结果为不确定，
则报告无法确定登革热病毒 IgG 升高，应该用另外一种方法重新检
测。或者，应该采集另一份样本。
阳性
检测到 IgG 抗体水平升高，推测患者近期接触过或目前感染了登革
热病毒，符合继发性感染的标准。通过当前的 CDC 导则确认结果来
诊断疾病。登革热感染的确诊请参考 CDC MMWR 建议和报告
1997:46 RR – 10（第 45 页至第 46 页）

【检验方法的局限性】

1. 必须结合患者的临床体征和症状来做临床诊断。该试剂盒的结果本身并没有诊断作用，应该与其他临

床数据和患者症状联用。

2. 不可用于筛查普通人群。阳性预测值取决于病毒存在的可能性。只能检测有临床症状或疑似接触过相

关病毒的患者。

3. 尚未确定目测结果判定的检测性能特征。

4. 必须谨慎判读免疫受抑制的患者结果。

5. 黄病毒属疾病（即圣路易脑炎，墨累山谷脑炎，日本脑炎，西尼罗河和黄热病病毒）之间的血清学交

叉反应是常见的。在确诊之前必须排除这些疾病。

6. 一般来说，初级响应者主要表现出单型抗体应答。但是，在连续感染期间，抗体应答扩大到对同一或

不同抗原组的其它黄病毒的异型反应。

7. Panbio Dengue IgG Capture ELISA 检测结果为阳性的所有血清必须送到参考实验室进行确认和流行

病学记录。

8. 当前感染登革热病毒的患者可能获得阴性结果。在感染非常早期获得的样本可能检测不到抗体。疑似

急性感染应该用 Panbio Early ELISA 或检测急性感染的其它试验来检测。

9. 原发性登革热感染个体康复后的样本 IgG 抗体水平可能高于测定阈值。建议在 6-15 天内检测样本来

准确区分原发性和继发性感染。

【产品性能指标】

研究中心 1

在位于布里斯班的 Panbio Ltd 公司用 Panbio Dengue IgG Capture ELISA 检测了共 316 份回顾性血清。

血清盘包含 161 份来自地方人口中健康捐献者的样本，66 份来自非地方人口的样本，35 份经过 HAI 检测为原发性登革热感染的阳性样本以及 54 份经过 HAI 检测为继发性登革热感染的阳性样本。根据检测结果，确定该试验的血清学灵敏度、特异性和一致性。

*由于样本量不足，没有重新检测结果不确定的样本。

95% CI #

血清学灵敏度（继发性） b = 52/54 = 96.3% 73.8 – 93.6%

血清学特异性（原发性） b = 32/35 = 91.4% 76.9 – 98.2%

血清学特异性（地方性） = 152/161 = 94.4% 88.4 – 100.0%

血清学特异性（非地方性） = 66/66 = 100.0% 88.4 – 100.0%

血清学一致性b = 302/316 = 95.6% 92.7 – 97.6%

a 经 HAI 检测为继发性登革热感染的阳性样本（滴度≥1280）。

b 不包括不确定的结果，因为没有对不确定的样本进行重新检测（见上述*）。

# 置信区间

研究中心2

用Panbio Dengue IgG Capture ELISA检测马来西亚一所大学收集的404份血清，血清的登革热特征经过

血凝抑制试验(HAI)、IgM ELISA、NS1 ELISA和PCR联合测定。血清盘包含125份来自地方人口的血清反

应阴性样本，101份经过分析（主要是配对样本分析）为原发性登革热感染的阳性样本以及178份经过分析（配对样本分析）为继发性登革热感染的阳性样本。这些样本代表疾病发作后2-15天的检测范围。根据检测结果，确定该试验的血清学灵敏度、特异性和一致性。

95% CI #

血清学灵敏度（继发性） = 144/178 = 80.9% 75.1 – 86.7%

血清学特异性（原发性） = 88/101 = 87.1% 80.6 – 93.7%

血清学特异性（地方阴性） = 125/125 = 100.0% 97.1– 100.0%

血清学一致性 = 357/404 = 88.4% 85.2 – 91.5%

a 在 10 份样本中有 7 份样本原发性登革热诊断结果不确定，原因是配对样本分离不足 7 天，恰巧后面一份样本的 HAI 滴度为 640。

b 在 31 份样本中有 27 份样本是在疾病发作后 2-5 天采集的。继发性检测的准确度在疾病发作后 6-15 天最佳，也就是该试验的推荐检测窗口。在 6-15 天窗口内继发性检测的灵敏度是 95.4%。

*由于样本量不足，没有重新检测结果不确定的样本。

# 置信区间

研究中心 3

在泰国曼谷具有国际地位的参考实验室检测了收集的 310 份配对血清，血清的登革热特征经过 PCR 以及

该参考实验室的内部登革热 IgM 和 IgG ELISAs 结合配对血清分析测定。血清包含从 30 名原发性登革热患者获得的 60 份阳性样本，从 100 名感染所有 4 种血清型的继发性登革热患者获得的 200 份阳性样本，以及从 25 名经过血清学和 PCR 检测均为阴性的患者获得的 50 份地方性样本。用 Panbio Dengue IgG Capture ELISA 检测全部血清以确定该试验的性能。